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人淋巴内皮细胞

提 供 商: 上海信裕生物科技有限公司 资料大小:
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详细介绍

人淋巴内皮细胞

 

细胞名称     人淋巴内皮细胞 

英文名称河北快3      

形态特性

生长特性 贴壁生长

特征特性

培养条件 DMEM高糖+10%FBS

传代方法 1:2传代

冻存条件 完全培养基+40%FBS+10%DMSO

支原体检测 阴性

使用权限 A类

人淋巴内皮细胞 增殖能力取决于细胞取材、培养技术、培养条件等综合因素。请按照正确的培养方法来解冻、传代,以此保证细胞具备良好的增殖能力,方便您的后继研究顺利进行

货号

规格

培养基

运输

保存

HZ-hxbz-056

1ml/株

    DMEM高糖+10%FBS

复苏运输

液氮保存

质量控制: 本细胞经过了检测,不含有细菌、真菌、病毒(HIVHBVHCV)、支原体。 

培养条件:37℃,5% CO2PH7.2~7.4,无菌恒温培养。 

用途: 本产品只提供给进一步的科研使用,不可应用于治疗等其他方面。

细胞相关操作(注意:细胞操作都需严格按照无菌操作)

收到复苏好的贴壁细胞的处理方法:

  • 先从外包装盒拿出细胞瓶,在细胞瓶表面喷一层酒精,并小心去掉封口膜;
  • 在显微镜下观察细胞状态,并确定是否染菌,如有染菌,请立即拍照,并将细胞丢掉;
  • 将培养瓶置于37°C5% CO2的无菌培养箱中培养4-6小时;
  • 倒掉多余的培养基,留正常体积的培养基;
  • 重新将培养瓶置于37°C5% CO2的无菌培养箱中培养过夜

6. 第二天传代。

收到冻存细胞的处理方法:

1.37°C水浴预热培养基

  1. 从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻(解冻后不要继续暖细胞)
  1. 在超净台中加入5ml培养基重悬细胞,1000rpm离心5min;

4.弃上清,加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中,轻轻晃匀

5.置于37°C,5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话,瓶盖不要拧太紧)

6.第二天,用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。

细胞传代

1.当细胞融合度达到90%以上时,给细胞传代

2.37°C水浴预热培养基

3.在超净台中,弃培养基,加入2-5mlPBS清洗细胞后,再加入1ml胰酶消化细胞

4.显微镜下观察到细胞变圆,有细胞开始脱离瓶壁时,加入5ml培养基终止消化;

5.用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞,并轻轻吹打将细胞吹散;

6.将细胞移入离心管中,1000rpm离心5min;

7.弃上清加入15-20ml的培养基重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中(确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间),细胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶),混匀细胞悬液,确保均匀分布;

8.将培养瓶置于37°C5% CO2的无菌培养箱中培养。

细胞冻存

1.37°C水浴预热培养基

2.消化细胞后给细胞计数:

1)洗净晾干血小板计数板和盖玻片,将盖玻片完全覆盖计数区;

2)充分混匀细胞,取少量(0.1-0.5ml)细胞悬液与等体积的染色液台盼蓝混合,移液器吹吸混合均匀,用移液器取20ul混合液从盖玻片两端(与中间凹槽平行的两端)分别打入细胞,以细胞悬液刚好浸湿盖玻片为佳;

3)显微镜下,数四个计数区的总细胞数,无活性细胞染成蓝色,活细胞不被染色;

4)细胞密度=细胞总数/4×10000×2

这里10000是不变的,因为计数的细胞是在体积为1mm×1mm×0.1mm10-4cm3计数池内,1cm3=1ml将四个计数区的细胞数除以4取平均数,乘2是补偿加等体积台盼蓝形成的稀释。

5)细胞活性=活细胞数/细胞总数×100%

:细胞密度高时,可调整细胞悬液和台盼蓝的比例,计数时乘以相应的稀释倍数即可

3.当细胞密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时,可以冻存细胞。

4.在超净台中将要冻存的细胞移入离心管,1000rpm离心5min

5.弃上清,用90%培养液+10%DMSO的混合液重悬细胞,并调整细胞密度为1-3×106/ml

6.将细胞悬液分装到冻存管中(1-1.5ml/管)

7.将装有细胞的冻存管放入程序降温冻存盒,-20°C1-2h后,-80°C过夜,然后快速转移到液氮中

电话:
021-60345312
021-60526354
手机:
15221858802
13816899465
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